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研域詳解:細胞凋亡的形狀學(xué)檢測辦法說明
更新時間:2020-03-16   點擊次數(shù):1275次

1 · 光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡

(1) 未染色細胞:凋亡細胞的體積變小、變形,細胞膜無缺但呈現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象,細胞凋亡晚期可見凋亡小體。貼壁細胞呈現(xiàn)舒展、變圓、墜落。
 
(2) 染色細胞:常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化,核膜裂解、染色質(zhì)切割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形狀。
 
2 · 熒光顯微鏡和共集合激光掃描顯微鏡
 
一般以細胞核染色質(zhì)的形狀學(xué)改動為目標(biāo)來評判細胞凋亡的發(fā)展情況。
 
Hoechst是與DNA特異結(jié)合的活性染料,貯存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,運用時用PBS稀釋成終濃度為2~5mg/ml。
 
DAPI為半通透性,用于慣例固定細胞的染色。貯存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,運用終濃度一般為0.5 ~1mg/ml。
 
效果評判:細胞凋亡過程中細胞核染色質(zhì)的形狀學(xué)改動分為三期:Ⅰ期的細胞核呈波紋狀(rippled)或呈折縫樣(creased),部分染色質(zhì)呈現(xiàn)濃縮情況;Ⅱa期細胞核的染色質(zhì)高度凝集、邊緣化;Ⅱb期的細胞核裂解為碎塊,發(fā)作凋亡小體)。

3 · 透射電子顯微鏡觀察
 
細胞效果評判:凋亡細胞體積變小,細胞質(zhì)濃縮。凋亡Ⅰ期(pro-apoptosis nuclei)的細胞核內(nèi)染色質(zhì)高度環(huán)繞,呈現(xiàn)許多稱為氣穴現(xiàn)象(cavitations)的空泡結(jié)構(gòu)(圖2);Ⅱa期細胞核的染色質(zhì)高度凝集、邊緣化;細胞凋亡的晚期,細胞核裂解為碎塊,發(fā)作凋亡小體。

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